آخر تحديث :الخميس-20 فبراير 2025-09:35م
جامعة عدن
رسائل ماجستير ودكتوراه

غمدان حسن عبدالله الذهب

الثلاثاء - 27 مايو 2014 - 08:47 ص بتوقيت عدن
غمدان حسن عبدالله الذهب






العنوان

دراسة الصفات الكيموحيوية لبكتريا Lactobacillus acidophilus       المعزولة من براز الطفل الرضيع 

الباحث

غمدان حسن عبدالله الذهب

المشرف لعلمي

أ. د. عبدالحميد سالم صقران

التخصص

علوم وتكنولوجيا الأغذية

الكلية

كلية ناصر للعلوم الزراعية

الجامعة

جامعة عدن

البلد

الجمهورية اليمنية

السنة

2010 م

الدرجة العلمية

ماجستير




ملخص الدراسة

  تهدف هذه الدراسة الحصول على بكتـريا Lactobacillus acidophilus من براز أطفال رضع ، حيث تم اختيارعينات الدراسة بطريقة العينة العشوائية من براز ثلاثة أطفال رضع يعتمدون في تغذيتهم على حليب الأم بشكل كامل وبالفئات العمرية التالية :الطفل الأول (A) 15 يوم ، الطفل الثاني (B) 18 يوم ، الطفل الثالث (C) 38 يوم. تم إعتماد مبدأ الحذف المرحلى المتتابع للبكتريا الأخرى المتواجدة فى عينات البراز إلى جانب بكتـريا Lactobacillus acidophilus على الأوساط الغذائية المختلفة وقد أظهـرت النتائج المتحصل بعد تحليلها إحصائيا مايلي :
  انخفضت عدد أطباق بتري التي ظهر بها نمو البكتريا فى الأوساط الغذائية المختلفة وذلك بتتابع خطوات عـزل البكتـريا مما أدى إلى ارتفاع النسبة المئوية لكفاءة استبعاد البكتـريا الأخرى المحتمل تواجدها مع بكتـرياLactobacillus acidophilus  حيث كان متوسط عدد أنابيب الإختبار التي ظهر بها نمو البكتـريا في الخطوة الأولى من خطوات العزل على الوسط الغذائي "MRS" 25 أنبوبة إختبار لعينات براز الثلاثة الأطفال وبنسبة مئوية لكفاءة استبعاد البكتـريا الأخرى 0.00 % , فيما كان متوسط عدد أطباق بتري التي ظهر بها نمو البكتـريا في الخطوة الثانية على الوسط الغذائي"MRS-Agar-CaCO3"  18.50طبق بتري لعينات براز الثلاثة الأطفال وبنسبة مئوية لكفاءة استبعاد البكتـريا الأخرى 26.00 % , وكان متوسط عدد  أطباق بتري التي ظهر بها نمو البكتـريا في الخطوة الثالثة على الوسط الغذائي "Aesculine-Agar-Cellobiaose" 6.00 أطباق بتري لعينات براز الثلاثة الأطفال وبنسبة مئوية لكفاءة استبعاد البكتـريا الأخرى76 % , فيما كان متوسط عدد أنابيب الإختبار التي ظهـر بها نمو البكتـريا في الخطوة الرابعة على الوسط الغذائي "MRS Carbohydrates" 1.83 أنبوبة إختبار وبنسبة مئوية لكفاءة استبعاد البكتـريا الأخرى 92.68% وبالتالي الوصول لأعلى كفاءة عزل للحصول على بكتـرياL.acidophilus  بصورة نقية .
  التحليل الإحصائي للنتائج أظهرزيادة معنوية حيث وجدت فروقات معنوية بين متوسطات نمو البكتـريا بقيم تفوق قيمة أقل فرق معنوي فى كل مراحل العـزل بإستثناء المرحلة الأولى من العـزل ، حيث كانت الفروقات المعنوية بين متوسطات نمو بكتـريا الطفل الأول والطفل الثالث في مراحل العـزل الثانية , الثالثة والأخيرة إضافة إلى ذلك فقد ظهرت فروقات معنـوية بين متوسطات نمو بكتريا الطفل الثاني والطفل الثالث في المرحلة الأخيرة من العـزل.   
  أظهرت البكتـريا قدرتها على إنتاج الحموضة حيث وصلت قيمة الحموضة المعايرة على أساس حامض اللاكتيك إلى (0.71 %) ، وأس هيدروجيني (4.4) وهذا يعد مؤشراً جيداً في القدرة على تثبيط العديد من البكتـريا المرضية.
  أبدت البكتـريا تجاة الإختبارات الكيموحيوية  قدرتها على تحليل النشاء ، فيما لم تظهر قدرتها على إنتاج الأمونيا مـن الحامض الأميني الأرجنين , تحليل الجلاتين , تحليل الكازين , إنتاج الإندول من الحامض الأميني التربتوفان وأيضاً عدم قدرتها على إنتاج إنـزيم الكاتليز. فيما أظهرت البكتـريا قدرتها على تخمير الكربوهيدرات المتعددة (الجلوكوز ، الفـركتوز ، اللاكتوز ، الإسكولين ، السكروز ، الجلاكتوز) وعدم قدرتها على تخميـر كربوهيدرات (الرايبوز ، المانيتول ، الأرابينوز ، الرافينوز) .
  أظهـرت البكتـريا قدرتها على النمو في درجات الحرارة المختلفة35) م� ، 45 م�) ، وعدم قدرتها على النمو فى درجة حرارة (15 م�) .
 
 
 

فهرس الـمحتويات


الموضوع

 

الصفحة

شهادة المشرف

أ

تاريخ مناقشة وإجازة الرسالة من قبل رئيس وأعضاء لجنة المناقشة

ب

ﺁية قرانية

ج

الإهداء

د

شكر وتقدير

هـ

الخلاصة

و

قائمة المحتويات

ك

الجداول  والأشكال

ل

قائمة المختصرات

م

االفصل الأول :  المقدمة

1

الفصل الثاني  : مراجعة المصادر

4

1 -1 تصنيف بكتريا  Lactobacillus acidophilus ضمن الأحياء الدقيقة

4

2-1 جنس بكتريا Lactobacillus    

4

1-3 بكتريا  Lactobacillus acidophilus   

5

4-1 الخصائص الوظيفية لبكتريا Lactobacillus acidophilus   

6

5-1 الخصائص الكيموحيوية لبكتريا Lactobacillus acidophilus

7

  6-1الأحياء الدقيقة في القناة الهضمية 

9

 7-1العوامل المؤثرة على نمو الأحياء الدقيقة في القناة الهضمية للإنسان

12

 8-1معوقات دراسة الأحياء الدقيقة في القناة الهضمية للإنسان

13

1-9 أنواع الأحياء الدقيقة في القناة الهضمية للإنسان

13

1-10 معاير عزل جنس بكتريا Lactobacillus 

14

11- 1 طرق حفظ مزارع البكتريا

14

  1-11-1الحفظ على فترات في بيئات جديدة

14

  2-11-1طريقة الحفظ تحت طبقة من الزيت

15

  3-11- 1طريقة الحفظ في جو مفرغ بعد التجفيف السريع

15

12-1 الأوساط الغذائية للتنقية وإكثار جنس بكتريا Lactobacillus

15



الموضوع

 

الصفحة

الفصل الثالث : المواد وطرائق العمل

17

1–2  المواد والأجهزة والأدوات

17

2-1-1 مصادرعينات البراز

17

  2-1-2  المواد الكيميائية المستخدمة في العمل

17

3-1-2  الأجهزة والأدوات المستخدمة في العمل

18

 4-1-2 الأوساط الغذائية

18

1-4-1-2  الوسط الغذائي  MRS

19

 2-4-1-2 الوسط الغذائي MRS - Agar - CaCO3   

19

3-4-1-2  الوسط الغذائي  Aesculin-Agar-Cellobiaose

19

4-4-1-2  الوسط الغذائي  Carbohydrates MRS

19

  5-4-1-2الوسط الغذائي  Starch-Agar

19

6-4-1-2  الوسط الغذائي Nutrient Gelatine  

20

7-4-1-2 الوسط الغذائي MRS-Arginine   

20

8-4 -1- 2  الوسط الغذائي Nutrient Agar   

20

9-4-1- 2  الوسط الغذائي Treptone  

20

10-4-1-2  الوسط الغذائي Milk-Agar 

20

2-2   طرائق العمل (خطوات عزل بكتريا Lactobacillus acidophilus

20

2-3   الإختبارات الكيموحيوية

22

2- 3-1 تحليل الكازين

22

 2- 3- 2  إنتاج إنزيم الكاتليز

23

2- 3- 3  تحليل النشاء

23

2- 3- 4  إنتاج الأمونيا من الأرجنين

23

2-3- 5  إنتاج الإندول من التربتوفان

23

2-3-6   تحليل الجيلاتين

23

2-3-7  تخمير الكربوهيدرات

24

2-3 - 8  إستجابة البكتريا للنمو في درجات الحرارة المختلفة

24

2- 3-9   تقدير الحموضة المعايرة و الأس الهيدروجيني

24




الموضوع

 

الصفحة

2-3 - 10 الصبغ بالجرام

25

  4-2التحليل الإحصائي

25

الفصل الرابع : النتائج والمناقشة

26

1-3 نمو وعزل بكتريا  Lactobacillus acidophilus          

26

2-3   إختبارات تخمير البكتريا للكربوهيدرات                                                            

30

3-3  الإختبارات الكيموحيوية                                                                            

31

  4-3تأثير درجات الحرارة على نمو البكتريا

33

5-3  الحموضة المعايرة والأس الهيدروجيني                                                        

34

الفصل الخامس : الإستنتاجات والتوصيات

36

الفصل السادس : المراجع

37

المراجع العربية

37

المراجع الأجنبية

38

الفصل السابع : Summary

w




Summary

  Thisstudy aims to get the kind of bacteria which is called Lactobacillusacidophilus from the feaces of infants. The samples of this study have beenrandomly selected from the feaces of three infants who depend on their mothersfor food (milk). The ages of those infants are 15, 18, and 38 days. Here it isimportant to note that this study primarily aims to study the infants’ excrement samples to know their Biochemical properties>

Four differentculture media were used to isolate Lactobacillusacidophilus bacteria, 25 test tubes as average, each is for three infants’excrement samples and the percentage of eliminating other bacteria was 0.00% inthe first culture media "MRS". 18.5 Petri dishes as average are forthe three infants’ excrement samples and the percentage of removing otherbacteria was 26.00 % in the second culture media "MRS-Agar-CaCO3".While 6.00 Petri dishes as average are for the three infants’ excrement samplesand the percentage of removing other bacteria was 76% in the third step ofisolation in the culture media"Aesculin-Agar-Cellobiaose". 1.83 Testtubes as average are for the three infants’ excrement samples and thepercentage of removing other bacteria was 92.68 % in the fourth culture media"MRS Carbohydrates".

The resultsshow significant differences in all steps of isolation except the first step ofisolation. To elaborate this it can be said that there is a very importantdifference between  the bacteria of theinfant no (A) and the bacteria of the infant no (C) in the steps (E) , (G) ,and (H) of the isolation .So regarding the least significant difference, it isclear that the difference between the growth of bacteria are more than theleast significant difference in the three steps (E) , (G) and (H) for thebacteria of the first (A) and third (C) infants. There is ,also, a veryimportant difference between the bacteria of the infant no (B) and the otherone no (C) in the last step of isolation.

The resultsshow the bacteria’s ability to produce acidity and reduce the " pH" .In other words the value of acidity of Lactic acid has reached 0.71 % , and thevalue of the pH has consequently reached " 4.4 " , and this is a goodindication that such conditions have the ability to inhibit the effectivenessof the pathogenic bacteria.

The resultsshow ,also, that the  bacteria growing inthe Biochemical tests , have the ability to analyze the Starch , but this kindof bacteria has shown no ability to produce Ammonia from Arginine acid .Inaddition to that it has not shown its ability to analyze Gelatin , Casein ,produce Indole from Treptophan acid , and produce Catalase enzyme.

To sum up, theresults of the research show that the bacteria growing in the Carbohydrates ,have the ability to ferment the Glucose, Fructose, Sucrose, Aesculin,Galactose, and Lactose. And they show, also, that the bacteria are not able toferment Ribose, Mannitol, Arabinose, and Raffinose.

In varioustemperatures ( 35�C,45�C) the research shows that this kind of  bacteria has the ability to become active andstart growing , but it has not shown its ability to grow in a certaintemperature (15�C).